紫外可見分光光度計是一種應(yīng)用很廣的分析儀器。當(dāng)前已成為全世界使用最多、覆蓋應(yīng)用面最廣的分析儀器。它的應(yīng)用領(lǐng)域涉及制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機械、冶金、石油、食品、生物、材料、計量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個方面，用來進行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定、反應(yīng)動力學(xué)研究等。因為儀器涉及到光學(xué)、電學(xué)和結(jié)構(gòu)等，所以它需要在一定的環(huán)境中應(yīng)用。

 

（1）定量分析

根據(jù)瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關(guān)系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計用的最多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：

 

A、絕對法：絕對法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用最多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎(chǔ)的分析方法，某一物質(zhì)在一定波長下ε值是一個常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個常數(shù)。因此，可用紫外可見分光光度計在λmax波長處，測定樣品溶液的吸光度值A(chǔ)。然后，根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。

 

B、標(biāo)準(zhǔn)法：在選定的波長處，在相同的測試條件下，分別測試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液C標(biāo)和被測試樣品溶液C樣的吸光度A標(biāo)和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。

C樣=A樣/A標(biāo)×C標(biāo)

 

C、標(biāo)準(zhǔn)曲線法

紫外可見分光光度計最常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長下，測試每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后，將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測得吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對應(yīng)的濃度或含量。

 

D、 其它分析方法

除上述幾個分析方法外經(jīng)常使用的分析方法外，還有比吸收系數(shù)法、最小二乘法、解聯(lián)立方程法和示差分光光度法。

 

（2）定性分析

如果未知物的紫外吸收光譜的最大吸收峰波長λmax、最小吸收峰波長λmin、最大摩爾吸光系數(shù)εmax，以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點與標(biāo)準(zhǔn)光譜數(shù)據(jù)完全一致，就可以認(rèn)為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。定量分析和定性分析是分光光度計的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應(yīng)該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。