分光光度計和酶標(biāo)儀有什么區(qū)別？
點(diǎn)擊: 次 時間:2022-02-21 11:23
分光光度計和酶標(biāo)儀都是實驗室常用的分析儀器，它們的測定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，測定的都是樣本的吸光度。
分光光度計是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線的科學(xué)儀器，測量范圍一般包括波長范圍為380~780nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～380nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測儀，可簡單地分為半自動和全自動兩大類，其核心都是一個比色計，即用比色法來進(jìn)行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計有特殊要求。
一、分光光度計和酶標(biāo)儀的區(qū)別
同為實驗室內(nèi)測定吸光度的儀器，分光光度計和酶標(biāo)儀存在一些不同之處，具體體現(xiàn)在以下三個方面：
1、盛裝待測溶液的容器
分光光度計用的是比色皿，酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用，每個比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，因此用它作為固相載體，酶標(biāo)板通常為48孔或96孔，每個微孔可以盛裝不同的溶液。
2、光路的方向
分光光度計是水平光路，而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
3、光路的長度
由于光密度(OD值)與吸光系數(shù)、待測組分的濃度以及光路長度成正比關(guān)系。分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm，所以光路長度固定為1cm，因此不同儀器不同批次測量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路，所以光路的長度應(yīng)該是液體液面的高度，所以測得的值受到樣品的體積的影響。
二、分光光度計和酶標(biāo)儀的優(yōu)缺點(diǎn)比較
儀器 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) | 主要應(yīng)用領(lǐng)域 |
分光光度計 | 檢測波長范圍較寬； 加樣量不一致對測量結(jié)果沒有影響。 | 工作量大，操作繁瑣，耗時； 耗試劑； 結(jié)果穩(wěn)定性差，重復(fù)性較差，誤差較大； 對于微量物質(zhì)，難以檢測到。 | 藥品檢驗、藥物分析、環(huán)境檢測、衛(wèi)生防疫食品、化工、科研等 |
酶標(biāo)儀 | 一次性處理樣品量大，省時； 樣本、試劑用量少； 操作簡單，重復(fù)性好，檢測速度快、效率高。
| 酶標(biāo)儀96孔板在紫外光區(qū)有較強(qiáng)的紫外吸收，應(yīng)盡量避免在300nm以下使用酶標(biāo)儀進(jìn)行含量測定； 必須確保微孔板每個孔加樣量嚴(yán)格一致，對實驗者的操作技能提出了更高的要求。 | 臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)等 |
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