一、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及方法原理

本方案參考GB 5009.28-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》中液相色譜法，該法適用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定。

樣品經(jīng)水提取，高脂肪樣品經(jīng)正己烷脫脂、高蛋白樣品經(jīng)蛋白沉淀劑沉淀蛋白，采用液相色譜分離、紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。

二、所需儀器和試劑

1、 上海儀電分析LC220高效液相色譜儀，配備紫外檢測器；

2、上海儀電分析AS2000自動(dòng)進(jìn)樣器；

3、色譜柱：C18柱，4.6 mm×250 mm，粒徑為5 μm，或其他等效色譜柱；

4、萬分之一電子天平；

5、渦旋振蕩器；

6、離心機(jī)：轉(zhuǎn)速>8000r/min；

7、勻漿機(jī)；

8、恒溫水浴鍋；

9、超聲波發(fā)生器。

10、1000mg/L苯甲酸、山梨酸、糖精鈉水溶液混標(biāo)；

11、氨水；

12、乙酸鋅；

13、無水乙醇；

14、正己烷；

15、甲醇；

16、乙酸銨；

17、甲酸。

三、測定方法

3.1標(biāo)準(zhǔn)系列的制備

3.1.1 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉（以糖精計(jì)）混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（200mg/L）)：分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容。于4 ℃貯存，保存期為3個(gè)月。

3.1.2 苯甲酸、山梨酸和糖精鈉（以糖精計(jì)）混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL，用水定容至10mL，配制成質(zhì)量濃度分別為 0 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用現(xiàn)配。

3.2 樣品準(zhǔn)備

取多個(gè)預(yù)包裝的飲料、液態(tài)奶等均勻樣品直接混合；非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿；固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻；奶酪、黃油、巧克力等采用50 ℃~60 ℃加熱熔融，并趁熱充分?jǐn)嚢杈鶆?。取其中?/span>200g裝入玻璃容器中，密封，液體試樣于4 ℃保存，其他試樣于-18 ℃保存。

3.3 試樣提取

3.3.1 一般性試樣

準(zhǔn)確稱取約2 g（精確到0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50℃水浴超聲20min，冷卻至室溫后加亞鐵**鉀溶液2mL和乙酸鋅溶液2mL，混勻，于8000r/min離心5min，將水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?/span>20mL，渦旋混勻后超聲5min，于8000r/min離心5 min ，將水相轉(zhuǎn)移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22 pm濾膜，待液相色譜測定。

注：碳酸飲料、果酒、果汁、蒸餾酒等測定時(shí)可以不加蛋白沉淀劑。

3.3.2 含膠基的果凍 、糖果等試樣

準(zhǔn)確稱取約2 g（精確到0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于70℃水浴加熱溶解試樣，于50℃水浴超聲20 min，之后的操作同3.3.1。

3.3.3 油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂試樣

準(zhǔn)確稱取約2 g（精確到0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，加正已烷10 mL，于60 ℃水浴加熱約5 min，并不時(shí)輕搖以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）25 mL，乙醇1 mL，渦旋混勻，于50℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后，加亞鐵**鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL,混勻，于8 000 r/min 離心5 min，棄去有機(jī)相，水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)?/span>3.3.1再提取一次后測定。

3.4 色譜條件

色譜柱：C18（250mm*4.6mm 5μm）或性能相當(dāng)者

流速：1 mL/min；

柱溫：28℃或室溫

波長：230 nm；

進(jìn)樣量：10μL

流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨溶液=5+95，注：當(dāng)存在干擾峰或需要輔助定性時(shí)，可以采用加入甲酸的流動(dòng)相來測定，如流動(dòng)相：甲醇+甲酸-乙酸銨溶液=8+92

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 標(biāo)樣譜圖