在選擇液相色譜柱時(shí)通常會(huì)遇到一個(gè)問(wèn)題：這根色譜柱能上多大的樣品量？雖然在做分析時(shí)會(huì)盡量避免色譜柱過(guò)載，但經(jīng)常會(huì)遇到一組分析物中同時(shí)包含了較高濃度的主成分（也就是藥物活性成分）和很低濃度的雜質(zhì)（包括工藝雜質(zhì)及降解雜質(zhì)），為了兼顧低濃度雜質(zhì)的靈敏度，必然要增大進(jìn)樣體積或者提高進(jìn)樣濃度以確保定量的準(zhǔn)確性，因此某些時(shí)候就會(huì)造成色譜柱的過(guò)載。色譜柱的過(guò)載可以分為質(zhì)量過(guò)載和體積過(guò)載。

1、質(zhì)量過(guò)載

質(zhì)量過(guò)載又稱為濃度過(guò)載，是指在小體積進(jìn)樣時(shí)（體積未過(guò)載），由于進(jìn)樣濃度較高，靠近譜峰峰帶的固定相被飽和，也就是說(shuō)進(jìn)樣某一組分超過(guò)了色譜柱的載樣量而出現(xiàn)過(guò)載的現(xiàn)象。一般表現(xiàn)為色譜峰峰形拖尾，柱效較低。那么一般載樣量是多少呢？通常對(duì)于內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，其載樣量<50μg。如果是做方法轉(zhuǎn)移到其他色譜柱上，則需要調(diào)整進(jìn)樣量，防止出現(xiàn)過(guò)載。

載樣量主要與色譜柱固定相和待分析物的性質(zhì)有關(guān)，首先固定相類型不一樣，品牌不一樣會(huì)造成載樣量較大的差異。其次待分析物質(zhì)性質(zhì)也會(huì)直接影響到色譜柱載樣量。例如離子態(tài)的堿性化合物就很容易過(guò)載，不僅無(wú)法達(dá)到<50μg的量級(jí)，有時(shí)候甚至1μg的量就能造成過(guò)載的現(xiàn)象。因此在常規(guī)疏水反相中，分子態(tài)的堿性化合物比離子態(tài)的堿性化合物有著更高的載樣量。目前的推測(cè)原因是離子態(tài)間互相排斥作用使得待分析組分在固定相表面更易達(dá)到飽和而造成過(guò)載。同時(shí)離子態(tài)的帶正電的堿性化合物也更容易和固定相中未鍵合的活性硅羥基發(fā)生次級(jí)相互作用。

針對(duì)質(zhì)量超載的問(wèn)題，最簡(jiǎn)單的方法則是減少進(jìn)樣量。

2、體積過(guò)載

進(jìn)樣體積太大通常會(huì)導(dǎo)致較寬的平頭峰，還會(huì)影響峰保留時(shí)間。體積過(guò)載對(duì)保留時(shí)間短的組分影響更大，而對(duì)于較后面流出的峰影響較小。那么如何選擇合適的進(jìn)樣體積呢？

對(duì)于在最佳流速下 ，允許樣品進(jìn)樣的Z大體積為：

其中：L為柱長(zhǎng)（mm），dc為內(nèi)徑（mm），dp為粒徑（μm）

常用的各規(guī)格色譜柱最大進(jìn)樣體積如下表：

注：最大進(jìn)樣體積取的近似整數(shù)。上表中各個(gè)數(shù)據(jù)是嚴(yán)格按照公式計(jì)算出來(lái)的，但是這個(gè)數(shù)據(jù)并不絕對(duì)。