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青椒中還原型維生素C含量的測定整體方案

點擊: 次 時間:2018-12-03 16:16

概述

維生素C是維持人體正常生理代謝不可缺少的一類有機化合物,在人體內(nèi)參與氨基酸和神經(jīng)傳遞、膠原蛋白合成,具有降低毛細(xì)血管的通透性,刺激凝血功能、增加對感染的抵抗作用等。人體缺少維生素C會引起多種疾病,如壞血病。

然而人體所需的維生素C大多數(shù)由新鮮的蔬菜供給,新鮮的青椒中維生素C的含量很高。因此,測定包括青椒在內(nèi)的新鮮蔬菜中維生素C的含量是營養(yǎng)分析的重要內(nèi)容。

 

還原型維生素C的測定方法很多,有熒光分光光度計法、過氧化物酶法、2,6-二氯靛酚法等。由于它較易被空氣中的氧所氧化,上述方法存在著各種各樣的缺陷。

本應(yīng)用方案選擇鉬藍(lán)比色分光光度法,因為磷鉬酸銨經(jīng)還原劑維生素C還原后,可以生成亮藍(lán)色的絡(luò)合物,通過分光比色可以測定青椒中還原維生素C。本法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高。

一、實驗部分

1.1儀器與試劑

紫外可見分光光度計

6%的鉬酸銨溶液:準(zhǔn)確稱取鉬酸銨 30. 0000g,加適量蒸餾水溶解后定容至 500mL ;

草酸- ED TA溶液:準(zhǔn)確稱取含結(jié)晶水的草酸 6. 5000g, ED TA 0.0600g,充分溶解定容至1000mL ;

偏磷酸-醋酸溶液:溶解20g片狀偏磷酸于40mL醋酸中,稀釋至500mL ,用濾紙過濾,取濾液備用;

標(biāo)準(zhǔn)V c溶液:準(zhǔn)確稱取 V c 0. 0500g;用上述配好的草酸- ED TA溶液定容于100mL的容量瓶中,使標(biāo)準(zhǔn)液濃度達(dá)到 0. 5m g mL ; 

6%的硫酸溶液。

1.2實驗方法

準(zhǔn)確稱取一定量的市售青椒,加入草酸- ED TA溶液,用攪碎機搗碎后移入250mL容量瓶中,定容,過濾,濾液即為待測樣品的提取液。吸取上述青椒的提取液 1mL于 25mL的容量瓶中,加入 9. 00mL草酸- ED TA溶液1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液和 3. 00mL的硫酸,最后再加入 3.00mL鉬酸銨,顯色后,以蒸餾水為參比測其吸光度。

二、結(jié)果與討論

2.1最大吸收波長的確定

取一定量的V c 0. 5m g mL標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用 1. 2所述的方法進行顯色后,在波長 600nm - 1100nm范圍內(nèi)用紫外可見分光光度計進行波長掃描,結(jié)果見圖 1。

 

由圖 1可見鉬藍(lán)的絡(luò)合物在 839nm處有最大吸收值,本實驗選擇 839nm為測定波長。

2.2鉬酸銨用量的影響

固定硫酸和V c標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量,改變鉬酸銨的用量,測其吸度。結(jié)果見圖2。由圖2可見隨著鉬酸銨用量的增大,吸光度也隨之增大,在3. 00mL左右吸光,本法選用 3.00mL鉬酸銨。

 

2.3酸度的影響

其他條件固定,改變硫酸的用量,測其吸光度。以硫酸的用量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),做曲線,結(jié)果見圖3。由圖3可見硫酸的體積在4. 00mL以內(nèi),吸光度比較穩(wěn)定,但大于4.00mL后隨之減小,超過5.00mL后吸光度驟然下降。所以本實驗硫酸的體積選用 3. 00mL.

 

2.4顯色時間的確定

吸取1. 00mL標(biāo)準(zhǔn)溶液V c于25mL容量瓶中,在上述最佳實驗條件下進行顯色后,在不同的顯色條件下測其吸光度,結(jié)果表明該體系在草酸- ED TA介質(zhì)中于室溫下13m in后反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定,本實驗選擇室溫下顯色時間為 13m in。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定

分別吸取 0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、1. 20mL的標(biāo)準(zhǔn)V c (0. 5m g mL )溶液于 25mL的容量瓶中,分別加入草酸- ED TA 9. 80、9. 60、9. 40、9. 20、9. 00、8. 80mL ,再分別加入 1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液,3. 00mL的硫酸溶液和3. 00mL的鉬酸銨溶液,顯色后測定其吸光度。繪制出以溶液濃度 (C )為橫坐標(biāo),吸光度 A為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過實驗方法測定V c濃度與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A = 13.580C + 0. 002,相關(guān)系數(shù) r = 0. 999。V c濃度在 0. 004- 0. 024m g mL范圍內(nèi)服從比耳定律。

2.6樣品回收率和變異系數(shù)的測定

準(zhǔn)確稱取市售青椒 176. 7914g,經(jīng)過處理后配成溶液,用上述方法平行測定 6次。測得吸光度,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)濃度,并從實驗結(jié)果計算出相對平均偏差,回收率和變異系數(shù),見表 1。

經(jīng)過計算市售青椒樣品中的還原型V c的含量為 0. 2390m g g,回收率為 97. 2%。變異系數(shù)為 2.51%。

三、結(jié)論

選用鉬藍(lán)分光法測定青椒中V c的含量,通過實驗確定最大吸收波長,硫酸和.磷鉬酸銨的最佳用量和最佳的顯色時間,并在最佳條件下測定樣品中V c含量,該方法簡便、快速、準(zhǔn)確。

(內(nèi)容來源渤海大學(xué)學(xué)報



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